結(jié)果描述

可能的原因

建議及預(yù)防措施

終止后,整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡色;或標(biāo)曲有線性但背景過(guò)高

整版發(fā)黃現(xiàn)象可能由于錯(cuò)加其他試劑造成

實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)所有組分均屬于對(duì)應(yīng)的試劑盒.不同試劑盒或不同批號(hào)

未充分清洗酶標(biāo)板

確保清洗過(guò)程中每個(gè)微孔所加入洗滌液量一致.清洗完成后,將酶標(biāo)板用力按壓在吸水紙上,以除去殘余的緩沖液.

孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟操作

酶標(biāo)記物污染了吸頭及盛放顯色劑容器或陽(yáng)性對(duì)照污染了微孔

吸取不同的試劑時(shí)應(yīng)更換吸頭,配置不同的試劑組分時(shí),應(yīng)使用不同的儲(chǔ)存器皿,操作時(shí)請(qǐng)使用移液器

檢測(cè)抗體貨Avidin-HRP的濃度過(guò)高

檢查濃度計(jì)算是否正確或進(jìn)一步稀釋后再使用

底物在使用前曝光或污染

加入底物前,應(yīng)始終避光保存

顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟操作

讀取了吸光值時(shí)使用了錯(cuò)誤的濾光片

TMB為底物時(shí)應(yīng)在450nm波長(zhǎng)讀取吸光值,并以650nm作為校正波長(zhǎng)

結(jié)果描述

可能的原因

建議及預(yù)防措施

顯色步驟結(jié)束后,酶標(biāo)板所有孔均無(wú)顏色;陽(yáng)性對(duì)照不明顯

組分試劑混淆使用

配制或使用時(shí)應(yīng)看清楚標(biāo)簽

洗版及加樣過(guò)程中,酶標(biāo)物受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力

確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑(如NaN3等),確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈.

遺漏了某種試劑或某個(gè)步驟

詳細(xì)審閱說(shuō)明書,并嚴(yán)格遵循操作步驟

結(jié)果描述

可能的原因

建議及預(yù)防措施

包括標(biāo)曲、樣本在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡

試劑盒超過(guò)有效期或儲(chǔ)存不當(dāng)

請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用,并按照說(shuō)明書推薦的保存條件保存,避免污染

試劑、樣品用前未平衡

所有試劑、樣品應(yīng)置室溫平衡30min左右

移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔

校正移液器,吸頭要配套,每次吸頭要吻合緊密,移液不宜過(guò)快,排放應(yīng)完全.吸頭內(nèi)壁要清潔,最好一次性使用.

孵育反應(yīng)時(shí)間不足

定時(shí)器準(zhǔn)確定時(shí)

顯色反應(yīng)不足

一般在15-30min

洗滌次數(shù)增加,濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求

減少洗滌沖擊力,按照說(shuō)明書要求稀釋濃縮洗液、洗滌時(shí)間,準(zhǔn)確記錄洗滌次數(shù)及用量

蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題

配置好的洗液一定要檢測(cè)PH值是否呈中性

洗板及加樣過(guò)程中,酶標(biāo)物受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力

確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑(如NaN3等),確認(rèn)配制洗液的容器已經(jīng)洗干凈,確認(rèn)配置洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染.

標(biāo)曲正常,樣本顯色較淡

樣本使用NaN3防腐劑,抑制了酶的反應(yīng)

樣本不可使用NaN3

待測(cè)樣本中可能不含強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的

如有懷疑,可以復(fù)檢

目測(cè)結(jié)果正常,但酶標(biāo)儀讀值偏低

讀取吸光值時(shí)使用了錯(cuò)誤的濾光片

TMB為底物時(shí)應(yīng)在450nm波長(zhǎng)讀取吸光值,并以650nm作為校正波長(zhǎng)

結(jié)果描述

可能的原因

建議及預(yù)防措施

重復(fù)性差

標(biāo)準(zhǔn)品配制有誤

嚴(yán)格按照說(shuō)明書標(biāo)準(zhǔn)品配制進(jìn)行操作,僅使用推薦的稀釋液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋

試劑盒儲(chǔ)存方法不當(dāng)或儲(chǔ)存環(huán)境太差

請(qǐng)?jiān)谡f(shuō)明書推薦的條件下保存,不要將重懸后的組分在室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

過(guò)早稀釋各工作組分

各工作組分請(qǐng)?jiān)谑褂们?/font>10分鐘配置,并立即加入到微孔中

樣本加入后未混勻

針對(duì)同時(shí)加入多種試劑組分,加樣后在混勻器上充分混勻,注意穩(wěn)拿穩(wěn)放,防止外濺

酶標(biāo)儀測(cè)定重復(fù)性差

校準(zhǔn)酶標(biāo)儀

孵育時(shí)間、洗滌條件、顯色條件、操作人員不一致

重復(fù)測(cè)定標(biāo)本,反應(yīng)條件、人員等盡可能與上次保持一致

洗滌不正確

移液器準(zhǔn)確加入200µl/孔洗滌液或注滿各孔,但不要溢出.洗板機(jī)洗板時(shí)不應(yīng)有堵孔,洗滌應(yīng)充分

孵育溫度恒溫效果不好

保持溫度恒定,避免局部溫度過(guò)高過(guò)低

加液時(shí),過(guò)多殘留于孔壁上

加液時(shí),吸頭在不碰到孔底的前提下盡量沿著孔壁下方加液

耗材重復(fù)使用

吸取不同的試劑時(shí)應(yīng)更換吸頭,配置不同的試劑組分時(shí),應(yīng)使用不同的儲(chǔ)液器皿

微孔底部被劃傷或者存在污垢

操作時(shí)細(xì)心,注意不要觸碰底部擦拭酶標(biāo)板底部,以去除污垢或者指紋

閾值附近時(shí)陰時(shí)陽(yáng)

同一樣品做3個(gè)復(fù)孔,以2個(gè)(含2個(gè)以上相同結(jié)果為準(zhǔn))

加樣時(shí)交叉污染

加標(biāo)本時(shí)盡量避免交叉污染

出現(xiàn)隨機(jī)性的花板、跳孔現(xiàn)象

手工洗板造成的交叉污染

手工洗板時(shí)前3次注洗液后應(yīng)立即棄去,后幾次再設(shè)定浸泡時(shí)間,可以減少交叉污染

拍板時(shí)交叉污染

拍板時(shí)用合適的吸水紙巾,不要把無(wú)關(guān)物質(zhì)拍進(jìn)板孔,并盡量不要在同一位置拍,以免交叉污染

洗板機(jī)加液頭堵塞導(dǎo)致加液不滿或吸液殘留量較大,造成花板、跳孔

疏通加液頭,使洗板時(shí)每孔均注滿洗液,吸液時(shí)殘留量要小

樣本離心處理不全,致使反應(yīng)孔內(nèi)發(fā)生凝血現(xiàn)象或存在沉淀物或殘留細(xì)胞成分干擾

血清血漿應(yīng)充分離心,3000rpm 6min以上

樣品放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),污染

樣品應(yīng)保持新鮮,或低溫保存,防止污染

洗滌液配制有誤或直接誤用濃縮洗滌液

請(qǐng)按說(shuō)明書配置