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血管形成實(shí)驗(yàn)及研究意義

供稿：恒意賽

發(fā)布時間：2024-06-11

瀏覽量：125次

【背景介紹】

血管形成是腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤與轉(zhuǎn)移的重要條件，其中腫瘤細(xì)胞自身分泌的生長因子可以誘導(dǎo)血管生成。惡性腫瘤通常伴有快速增長和密集的血管，抑制血管生成可以有效地阻止腫瘤組織的生長和擴(kuò)散，體外血管生成實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚰M腫瘤的血管發(fā)生過程，并且適用于研究藥物對此過程的影響。

【血管形成實(shí)驗(yàn)】

01 實(shí)驗(yàn)原理

內(nèi)皮細(xì)胞保留了分裂和快速遷移的能力，可響應(yīng)血管生成信號。

02 血管形成一般使用哪些細(xì)胞？

多種類型的內(nèi)皮細(xì)胞均可用于本實(shí)驗(yàn)，包括原代細(xì)胞和永生化細(xì)胞系。常用的有“人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）”，之所以不采用靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞與動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞是因?yàn)镠UVEC具有干細(xì)胞的潛能，理論上可以傳代50-60次。此外小鼠3B-11細(xì)胞、小鼠SVEC4-10細(xì)胞或原代內(nèi)皮細(xì)胞也可用于血管形成實(shí)驗(yàn)。

03 實(shí)驗(yàn)操作步驟

a.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備與材料：

實(shí)驗(yàn)前一天將Matrigel置于冰盒中，放入冰箱過夜，4℃溫度，使膠緩慢融化。同樣提前將槍頭、EP管、96孔板放入4℃度冰箱中預(yù)冷。

b.分裝：

將凍融的Matrigel進(jìn)行分裝，并用預(yù)冷槍頭混勻，以300ul/管分裝到EP管中，整個過程始終是在冰盒中進(jìn)行。

c.鋪膠：

將96孔板放在冰盒上，以每孔50ul把基質(zhì)膠加到96孔板內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡，加完稍微搖晃均勻放在4℃冰箱中靜置20-30min，再放入37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中1h等待凝固。

d.收集：

當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞達(dá)到80%時匯合度后準(zhǔn)備消化，收集細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并按照稀釋調(diào)整細(xì)胞的密度（初次實(shí)驗(yàn)設(shè)置細(xì)胞密度建議：3~10*10^4細(xì)胞）。

e.觀察：

96孔板加入100ul的細(xì)胞懸液，做好標(biāo)記后放入37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。四小時后可見血管形成。在鏡下觀察并拍照，時間為14~18h。結(jié)果分析。